Real-time PCR

تکثیر microRNA به کمک Real-time PCR یکی از پر کاربردترین تکنیک ها در حوزه تحقیقاتی microRNA می باشد. اساس این تکنیک مشابه روشهای معمولی Real-time PCR می باشد، با این تفاوت که به واسطه کوچکی اندازه microRNAها راهکارهای خاصی برای این منظور ارایه شده است. افزودن یک دم polyA به miRNAهای مورد نظر یکی از این شیوه هاست که درکیت PARSGENOME MiR-Amp kit نیز از همین روش برای تکثیر miRNAها استفاده شده است. Real-time PCR

ادامه نوشته

استخراج RNA

 استخراج RNA یکی از مراحل اساسی در اکثر تحقیقات انجام شده در زمینه miRNA است. روشهای متفاوتی برای استخراج RNA تام وجود دارد اما فقط برخی از آنها می توانند RNA های کوچک مولکول را حفظ کرده و استخراج نمایند. دستورالعمل زیر توسط تیم تحقیقاتی ما برای استخراج RNA تام حاوی  miRNA بهینه سازی و آزموده شده است. این دستورالعمل برای محلولهای استخراج با پایه گوانیدین ایزوتیوسیانات- فنل: کلروفرم قابل استفاده است.

ادامه نوشته

استخراج DNA

نقطه آغاز بسیاری از روش های مولکولی ضرورت جداسازی DNA با کیفیت عالی است. معمولاٌ کیفیت DNA با عواملی از قبیل عدم آلودگی ناشی از RNA ، پروتئین، لیپید و سایر ساختارهائی که برای آنزیم های برشی و پلی مرازها مزاحمت ایجاد می کنند، سنجیده می شود. به علت بزرگ بودن اندازه DNA ژنومی در پستانداران، روش های استخراج باید حداقل استرس مکانیکی را در طی عمل ایجاد نمایند.

ادامه نوشته